LyoDt® Αντιδραστήριο ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο με λυοφιλοποίηση για Vibrio cholerae O1/O139 - Δεν απαιτείται ψυχρή αλυσίδα & Προ-διανεμημένο για μία δοκιμή

LyoDt^® Αφυδατωμένο Real-Time PCR Αντιδραστήριο Ανίχνευσης για Vibrio cholerae O1/O139

Χρήση’s Εγχειρίδιο

1. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ

Vibrio cholerae είναι ένα Gram-αρνητικό βακτήριο που προκαλεί χολέρα, μια οξεία εντερική μολυσματική ασθένεια που χαρακτηρίζεται από ταχεία έναρξη, υψηλή μεταδοτικότητα και σημαντική θνησιμότητα. Ως ασθένεια που υπόκειται σε καραντίνα σύμφωνα με τους Διεθνείς Κανονισμούς Υγείας, περιλαμβάνει κυρίως τις οροομάδες O1 και O139. 

Αυτό το προϊόν είναι ένα αφυδατωμένο αντιδραστήριο real-time PCR για την ανίχνευση του Vibrio cholerae O1/O139. Χρησιμοποιεί το εξαιρετικά διατηρημένο rfb γονίδιο του Vibrio cholerae O1/O139 ως στόχο ανίχνευσης. Είναι ένα mastermix που περιέχει όλα τα απαραίτητα συστατικά, εκτός από το πρότυπο DNA, και είναι προ-δοσολογημένο ως single-test σε σωληνάρια PCR για εύκολη χρήση. Αυτό το προϊόν δεν απαιτεί ψυχρή αλυσίδα για μεταφορά και αποθήκευση, γεγονός που μειώνει σημαντικά το κόστος αποστολής και εξαλείφει πιθανές απώλειες από σπατάλη αντιδραστηρίων και μόλυνση από αεροζόλ.

2. ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΕΣ & ΣΥΝΘΕΣΗ

3. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ

Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (5-30°C). Είναι σταθερό για έως και 12 μήνες. Μόλις ανοίξει η συσκευασία κενού, αποθηκεύστε τα αχρησιμοποίητα προϊόντα στην παρεχόμενη επανασφραγιζόμενη πλαστική σακούλα με τα ξηραντικά, και στη σακούλα αλουμινίου. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: 

Η μείωση του σφαιριδίου του αντιδραστηρίου είναι ένδειξη διείσδυσης υγρασίας στον σωλήνα και το αντιδραστήριο είναι υγρό. Οποιαδήποτε αντιδραστήρια με σημαντικά μικρότερο μέγεθος σφαιριδίου από το συνηθισμένο θα πρέπει να απορρίπτονται ή να ελέγχονται με θετικό έλεγχο πριν από τη χρήση για τη δοκιμή δείγματος.   

4. ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΟΣ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ & ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ

1) Όργανο Real-time PCR

2) Πιπέτες και άκρες

3) Νουκλεάση-απαλλαγμένο νερό

4) Σετ εξαγωγής νουκλεϊκού οξέος

5. ΣΥΜΒΑΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ REAL-TIME PCR

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. ΑΠΟΔΕΚΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ

Ζωμός εμπλουτισμού τροφίμων, κ.λπ.

7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ

1) Νουκλεϊκό Αξύδι Εξαγωγή

Εξαγωγή DNA από δείγματα χρησιμοποιώντας ένα κατάλληλο κιτ εξαγωγής. Συνιστάται το DNA να εκλούεται με περίπου 100μl ρυθμιστικού εκλούσης (TE ή απαλλαγμένο από νουκλεάση H₂O) στο τελικό στάδιο της εξαγωγής. Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί αμέσως ή να αποθηκευτεί στους -20°C.

2) Προετοιμασία Θετικού Ελέγχου

Ο θετικός έλεγχος μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από την ενυδάτωση για έως και 12 μήνες. Θα πρέπει να ενυδατωθεί πριν από τη χρήση προσθέτοντας 250 μl ρυθμιστικού TE ή nuclease-free H₂O, αναδεύεται με στροβιλισμό σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρείται σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα. Χρησιμοποιήστε αμέσως ή αποθηκεύστε στους -20°C.

3) Real-Time PCR Mix Προετοιμασία

A) Ανοίξτε τη συσκευασία κενού και βγάλτε τη λωρίδα των 8 σωληναρίωνs που περιέχει το αντιδραστήριο. Ελέγξτε ότι το σφαιρίδιο είναι στο κάτω μέρος του σωλήνα (Κόψτε τον αριθμό των σωληναρίων όπως απαιτείται αν απαιτείται). Εάν τα παρεχόμενα σωληνάρια δεν είναι συμβατά με το όργανό σας, μεταφέρετε το σφαιρίδιο του αντιδραστηρίου σε ένα οπτικό σωληνάριο συμβατό με το όργανό σας.

B) Ανοίξτε τα σωληνάρια και απορρίψτε το(τα) καπάκι(α) (δεν είναι κατάλληλα για μηχανές real-time PCR) και ετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης σε πάγο όπως παρακάτω.

* Απαλλαγμένο από νουκλεάση νερό μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αρνητικός έλεγχος.

C) Καλύψτε το PCR χρησιμοποιώντας καπάκια (λωρίδες) κατάλληλα για real time PCR(δεν παρέχονται).

D) Αναδεύστε με στροβιλισμό τα σωληνάρια σε χαμηλή ταχύτητα για 10~15 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρήστε στα 3000rpm για 20 δευτερόλεπτα και τοποθετήστε τα σε ένα όργανο real-time PCR.

4) Ρύθμιση RT-PCR

Ορίστε τον όγκο αντίδρασης στα 25μl και τη διαδικασία ενίσχυσης PCR όπως παρακάτω. Συλλέξτε το FAM (για O1), JOE (για O139)  φθορισμό στους 60°C και επιλέξτε ΚΑΝΕΝΑ ως παθητική αναφορά.

5) Αποτέλεσμα Ανάλυση και Ερμηνεία