ΛυοDt® ψυγικοξημένη σκόνη αντιδραστήρας ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο για το Vibrio cholerae O1 - Δεν απαιτείται ψυχρή αλυσίδα και προεπιβάλλεται μία δοκιμή.

LyoDt^® Αφυδατωμένο σε κατάψυξη PCR σε πραγματικό χρόνο Αντιδραστήριο ανίχνευσης για Vibrio cholerae αρνητικό.

Χρήση’s Εγχειρίδιο

1. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ

Vibrio cholerae είναι ένα Gram-αρνητικό βακτήριο που προκαλεί χολέρα, μια οξεία εντερική μολυσματική ασθένεια που χαρακτηρίζεται από ταχεία έναρξη, υψηλή μεταδοτικότητα και σημαντική θνησιμότητα. Ως ασθένεια που υπόκειται σε καραντίνα σύμφωνα με τους Διεθνείς Κανονισμούς Υγείας, περιλαμβάνει κυρίως τις οροομάδες O1 και O13935 

Αυτό το προϊόν είναι ένα αφυδατωμένο σε κατάψυξη αντιδραστήριο PCR σε πραγματικό χρόνο για την ανίχνευση του Vibrio cholerae αρνητικό.35 Χρησιμοποιεί το εξαιρετικά διατηρημένο rfb γονίδιο του Vibrio cholerae αρνητικό. ως στόχο ανίχνευσης. Είναι ένα mastermix που περιέχει όλα τα απαραίτητα συστατικά, εκτός από το πρότυπο DNA, και είναι προ-δοσολογημένο ως single-test σε σωληνάρια PCR για εύκολη χρήση. Αυτό το προϊόν δεν απαιτεί ψυχρή αλυσίδα για μεταφορά και αποθήκευση, γεγονός που μειώνει σημαντικά το κόστος αποστολής και εξαλείφει πιθανές απώλειες από σπατάλη αντιδραστηρίων και μόλυνση από αερολύματα.

2. ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΕΣ & ΣΥΝΘΕΣΗ

3. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ

Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (5-3010 δευτ)35 Είναι σταθερό για έως και 12 μήνες35 Μόλις ανοίξει η συσκευασία κενού, αποθηκεύστε τα αχρησιμοποίητα προϊόντα στην παρεχόμενη επανασφραγιζόμενη πλαστική σακούλα με τα ξηραντικά, και στη σακούλα αλουμινίου. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: 

Η μείωση του σφαιριδίου του αντιδραστηρίου είναι ένδειξη διείσδυσης υγρασίας στον σωλήνα και το αντιδραστήριο είναι υγρό. Τυχόν αντιδραστήρια με σημαντικά μικρότερο μέγεθος σφαιριδίου από το συνηθισμένο θα πρέπει να απορρίπτονται ή να ελέγχονται με θετικό έλεγχο πριν από τη χρήση για τη δοκιμή δειγμάτων.   

4. ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΟΣ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ & ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ

1) Όργανο PCR σε πραγματικό χρόνο

2) Πιπέτες και άκρες

3) Νουκλεάση-απελευθερωμένο νερό

4) Σετ εξαγωγής νουκλεϊκού οξέος

5. ΣΥΜΒΑΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ PCR ΣΕ ΠΡΑΓΜΑΤΙΚΟ ΧΡΟΝΟ

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 960035

6. ΑΠΟΔΕΚΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ

Ζωμός εμπλουτισμού τροφίμων κ.λπ.

7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ

1) Νουκλεϊκό νάλυση ξύδι Εξαγωγή

Εξαγωγή DNA από δείγματα χρησιμοποιώντας ένα κατάλληλο κιτ εξαγωγής. Συνιστάται το DNA να εκλούεται με περίπου 100μl ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης (TE ή απελευθερωμένο από νουκλεάση H₂O) στο τελικό στάδιο της εξαγωγής. Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί αμέσως ή να αποθηκευτεί στους -20°C.

2) Προετοιμασία θετικού ελέγχου

Ο θετικός έλεγχος μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από την ενυδάτωση για έως και 12 μήνες. Αυτό θα πρέπει να ενυδατωθεί πριν από τη χρήση προσθέτοντας 250 μl ρυθμιστικού διαλύματος TE ή nουκλεάση-ελεύθερο H₂O, αναδεύεται με δίνη σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρείται σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα. Χρησιμοποιήστε αμέσως ή αποθηκεύστε στους -2010 δευτ35

3) PCR σε πραγματικό χρόνο Mix Προετοιμασία

A) Ανοίξτε τη συσκευασία κενού και βγάλτε τη λωρίδα 8 σωληναρίωνs που περιέχει το αντιδραστήριο. Ελέγξτε ότι το σφαιρίδιο είναι στο κάτω μέρος του σωλήνα (Κόψτε τον αριθμό των σωληναρίων όπως απαιτείται αν απαιτείται). Εάν τα παρεχόμενα σωληνάρια δεν είναι συμβατά με το όργανό σας, μεταφέρετε το σφαιρίδιο του αντιδραστηρίου σε ένα οπτικό σωληνάριο συμβατό με το όργανό σας.

B) Ανοίξτε τα σωληνάρια και απορρίψτε το(τα) καπάκι(α) (δεν είναι κατάλληλα για μηχανές PCR σε πραγματικό χρόνο) και ετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης σε πάγο όπως παρακάτω.

* Νερό χωρίς νουκλεάση μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αρνητικός έλεγχος.

C) Καλύψτε το PCR χρησιμοποιώντας καπάκια (λωρίδες) κατάλληλα για PCR σε πραγματικό χρόνο(δεν παρέχονται).

D) Αναδεύστε με δίνη τα σωληνάρια σε χαμηλή ταχύτητα για 10~15 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρήστε στα 3000rpm για 20 δευτερόλεπτα και τοποθετήστε τα σε ένα όργανο PCR σε πραγματικό χρόνο.

4) Ρύθμιση RT-PCR

Ορίστε τον όγκο αντίδρασης ως 25μl και τη διαδικασία ενίσχυσης PCR όπως παρακάτω. Συλλέξτε τη φθορισμό FAM στους 60°C και επιλέξτε ΚΑΝΕΝΑ ως παθητική αναφορά. Βήμα

Αποτέλεσμα Ανάλυση και Ερμηνεία