Αντιδραστήριο ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο με λυοφιλοποίηση για ευαίσθητη ανίχνευση του Listeria monocytogenes χωρίς ψυχρή αλυσίδα

LyoDt^® Αφυδατωμένο σε κατάψυξη PCR σε πραγματικό χρόνο Αντιδραστήριο ανίχνευσης για Listeria monocytogenes

Χρήση’s Εγχειρίδιο

1. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ

Listeria monocytogenes, ένα Gram-θετικό μικρό βακίλλιο, είναι ένα ζωονόσο παθογόνο που μεταδίδεται κυρίως μέσω της στοματο-κοπρικής οδού. Επιπλέον, μπορεί να εισέλθει στο σώμα μέσω οφθαλμικής επαφής ή σπασμένου δέρματος/βλεννογόνων. Η μόλυνση εκδηλώνεται συνήθως ως σηψαιμία, μηνιγγίτιδα και μονοκυττάρωση.

Αυτό το προϊόν είναι ένα αφυδατωμένο σε κατάψυξη αντιδραστήριο PCR σε πραγματικό χρόνο για την ανίχνευση του Listeria monocytogenes35 Χρησιμοποιεί το εξαιρετικά διατηρημένο hlyA γονίδιο του Listeria monocytogenes ως στόχο ανίχνευσης. Είναι ένα mastermix που περιέχει όλα τα απαραίτητα συστατικά, εκτός από το πρότυπο DNA, και είναι προ-δοσομετρημένο ως single-test σε σωλήνες PCR για εύκολη χρήση. Αυτό το προϊόν δεν απαιτεί ψυχρή αλυσίδα για μεταφορά και αποθήκευση, γεγονός που μειώνει σημαντικά το κόστος αποστολής και εξαλείφει πιθανές απώλειες από σπατάλη αντιδραστηρίων και μόλυνση από αεροζόλ.

2. ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΕΣ & ΣΥΝΘΕΣΗ

3. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ

Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (5-3010 δευτ)35 Είναι σταθερό για έως και 12 μήνες35 Μόλις ανοίξει η συσκευασία κενού, αποθηκεύστε τα αχρησιμοποίητα προϊόντα στην παρεχόμενη επανασφραγιζόμενη πλαστική σακούλα με τα ξηραντικά, και στη σακούλα αλουμινίου. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: 

Η συρρίκνωση του σφαιριδίου του αντιδραστηρίου είναι ένδειξη διείσδυσης υγρασίας στον σωλήνα και το αντιδραστήριο είναι υγρό. Οποιαδήποτε αντιδραστήρια με σημαντικά μικρότερο μέγεθος σφαιριδίου από το συνηθισμένο θα πρέπει να απορρίπτονται ή να ελέγχονται με θετικό έλεγχο πριν από τη χρήση για τη δοκιμή δειγμάτων.   

4. ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΟΣ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ & ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ

1) Όργανο PCR σε πραγματικό χρόνο

2) Πιπέτες και άκρες

3) Νουκλεάση-απελευθερωμένο νερό

4) Σετ εξαγωγής νουκλεϊκού οξέος

5. ΣΥΜΒΑΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ PCR ΣΕ ΠΡΑΓΜΑΤΙΚΟ ΧΡΟΝΟ

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 960035

6. ΑΠΟΔΕΚΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ

Ζωμός εμπλουτισμού τροφίμων, εμετός, δείγματα διάρροιας κ.λπ.

7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ

1) Νουκλεϊκό νάλυση ξύδι Εξαγωγή

Εξαγωγή DNA από δείγματα χρησιμοποιώντας ένα κατάλληλο κιτ εξαγωγής. Συνιστάται ότι το DNA εκλούεται με περίπου 100μl ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης (TE ή απελευθερωμένο από νουκλεάση H₂O) στο τελικό στάδιο της εξαγωγής. Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί αμέσως ή να αποθηκευτεί στους -20°C.

2) Προετοιμασία θετικού ελέγχου

Ο θετικός έλεγχος μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από την ενυδάτωση για έως και 12 μήνες. Αυτό θα πρέπει να ενυδατωθεί πριν από τη χρήση προσθέτοντας 250 μl ρυθμιστικού διαλύματος TE ή nουκλεάση-ελεύθερο H₂O, αναδεύεται σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρείται σε χαμηλή ταχύτητα για 15-20 δευτερόλεπτα. Χρησιμοποιήστε αμέσως ή αποθηκεύστε στους -2010 δευτ35

3) PCR σε πραγματικό χρόνο Mίγμα Προετοιμασία

A) Ανοίξτε τη συσκευασία κενού και βγάλτε τη λωρίδα των 8 σωλήνωνs που περιέχει το αντιδραστήριο. Ελέγξτε ότι το σφαιρίδιο είναι στο κάτω μέρος του σωλήνα (Κόψτε τον αριθμό των σωλήνων όπως απαιτείται αν απαιτείται). Εάν οι παρεχόμενοι σωλήνες δεν είναι συμβατοί με το όργανό σας, μεταφέρετε το σφαιρίδιο του αντιδραστηρίου σε έναν οπτικό σωλήνα συμβατό με το όργανό σας.

B) Ανοίξτε τους σωλήνες και απορρίψτε το(τα) καπάκι(α) (δεν είναι κατάλληλο για μηχανές PCR σε πραγματικό χρόνο) και προετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης σε πάγο όπως παρακάτω.

* Το νερό χωρίς νουκλεάση μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αρνητικός έλεγχος.

C) Καλύψτε το PCR χρησιμοποιώντας καπάκια (λωρίδες) κατάλληλα για PCR σε πραγματικό χρόνο(δεν παρέχονται).

D) Αναδεύστε τους σωλήνες σε χαμηλή ταχύτητα για 10~15 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρήστε στα 3000rpm για 20 δευτερόλεπτα και τοποθετήστε τα σε ένα όργανο PCR σε πραγματικό χρόνο.

4) Ρύθμιση RT-PCR

Ορίστε τον όγκο αντίδρασης ως 25μl και τη διαδικασία ενίσχυσης PCR όπως παρακάτω. Συλλέξτε τη φθορισμό FAM στους 60°C και επιλέξτε ΚΑΝΕΝΑ ως παθητική αναφορά. Βήμα

Αποτέλεσμα Ανάλυση και Ερμηνεία