Αντιδραστήρας ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο LyoDt® για Cronobacter ψυγείο-ξηραμένη σκόνη

Αντιδραστήρας ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο LyoDt® για Cronobacter ψυγείο-ξηραμένη σκόνη

1.ΠΡΟΣΟΧΗ

Κρονοβακτήριαείναι ένα νεοπροσδιορισμένο γένος βακτηρίων, του οποίου ο προκάτοχος είναιΕντερόβακτορα σακαζακί. Κρονοβακτήριαείναι ένα σοβαρό τροφικό παθογόνο που μεταδίδεται κυρίως μέσω μολυσμένων γαλακτοκομικών παρασκευασμάτων για βρέφη, προκαλώντας νεογέννητη μηνιγγίτιδα, σήψη και νεκρωτική εντεροκολίτιδα.

Το προϊόν αυτό είναι ένα αντιδραστήριο PCR σε πραγματικό χρόνο που στεγνώνεται με ψύξη για την ανίχνευσηΚρονοβακτήριαΧρησιμοποιεί το υψηλά διατηρημένο γονίδιο ompA τουΚρονοβακτήριαΠρόκειται για ένα μείγμα που περιέχει όλα τα απαραίτητα συστατικά, εκτός από το πρότυπο DNA, και προδιανέμεται ως ενιαία δοκιμή σε σωλήνες PCR για εύκολη χρήση.Το προϊόν αυτό δεν απαιτεί ψυχρή αλυσίδα για τη μεταφορά και την αποθήκευση, η οποία μειώνει σημαντικά το κόστος αποστολής και εξαλείφει πιθανές απώλειες λόγω σπατάλης αντιδραστηρίου και μόλυνσης από αερολύματα.

2. Ειδικές προδιαγραφές και σύνθεση

3. Αποθήκευση Και διάρκεια ζωής

Φυλάσσεται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (5-30°C). Είναι σταθερό για έως και 12 μήνες.και στην τσάντα από χαρτί αλουμινίου.

Προσοχή:

Η μείωση του σφαιριδίου αντιδραστήρα είναι ένδειξη της εισόδου υγρασίας στον σωλήνα και της υγρασίας του αντιδραστήρα.Οποιαδήποτε αντιδραστήρια με σημαντικά μικρότερο μέγεθος σφαιριδίων από το συνηθισμένο πρέπει να απορρίπτονται ή να υποβάλλονται σε δοκιμή με θετικό έλεγχο πριν από τη χρήση.για δοκιμή δειγμάτων.

4Απαιτείται πρόσθετος εξοπλισμός και αντιδραστήρες

1) Εργαλείο PCR σε πραγματικό χρόνο

2) Πιπέτες και άξονες

3) Νερό χωρίς νουκλεάσες

4) Κιτ εξαγωγής νουκλεϊκού οξέος

5. Συμφωνούμενα συστήματα PCR σε πραγματικό χρόνο

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. ΑΝΑΝΩΡΙΣΤΕΜΑΤΑ δείγματα

Προϊόντα εμπλουτισμού τροφίμων με ζωμό, εμετό, δείγματα διάρροιας κλπ.

7. ΕΠΙΔΡΟΠΗ ΕΠΙΔΡΟΠΗ

1) Εξόρυξη πυρηνικού οξέος

Αποσπάστε DNA από δείγματα χρησιμοποιώντας ένα κατάλληλο κιτ εξαγωγής.Συνιστάται ηΔΝΤελαύνεται με περίπου 100μl αποθέματος ασφαλείας ελαύσεως(ΤΕήΧωρίς νουκλεάση H₂Ο) στο τελικό στάδιο τηςεξόρυξη.Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ πρέπει να χρησιμοποιείται αμέσως ή να φυλάσσεται σε θερμοκρασία - 20°C.

2) Προετοιμασία θετικού ελέγχου

Ο θετικός έλεγχος μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από την επανυδάτωση για έως και 12 μήνες.₂Χρησιμοποιείται αμέσως ή φυλάσσεται σε θερμοκρασία - 20°C.

3) Προετοιμασία συνδυασμού PCR σε πραγματικό χρόνο

Α) Ανοίξτε την συσκευασία κενού και αφαιρέστε τις ταινίες 8 σωλήνων που περιέχουν το αντιδραστήρα.Εάν οι παρεχόμενοι σωλήνες δεν είναι συμβατοί με το όργανο σας, μεταφέρετε το σφαιρίδιο αντιδραστήρα σε έναν οπτικό σωλήνα συμβατό με το όργανο σας.

Β) Ανοίξτε τους σωλήνες και απορρίψτε το καπάκι (δεν είναι κατάλληλο για μηχανές PCR σε πραγματικό χρόνο) και προετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης στον πάγο όπως παρατίθεται παρακάτω.

βήμαεξόρυξη.Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ πρέπει να χρησιμοποιείται αμέσως ή να φυλάσσεται σε θερμοκρασία - 20°C.

2) Προετοιμασία θετικού ελέγχου

Ο θετικός έλεγχος μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από την επανυδάτωση για έως και 12 μήνες.₂Χρησιμοποιείται αμέσως ή φυλάσσεται σε θερμοκρασία - 20°C.

3) Προετοιμασία συνδυασμού PCR σε πραγματικό χρόνο

Α) Ανοίξτε την συσκευασία κενού και αφαιρέστε τις ταινίες 8 σωλήνων που περιέχουν το αντιδραστήρα.Εάν οι παρεχόμενοι σωλήνες δεν είναι συμβατοί με το όργανο σας, μεταφέρετε το σφαιρίδιο αντιδραστήρα σε έναν οπτικό σωλήνα συμβατό με το όργανο σας.

Β) Ανοίξτε τους σωλήνες και απορρίψτε το καπάκι (δεν είναι κατάλληλο για μηχανές PCR σε πραγματικό χρόνο) και προετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης στον πάγο όπως παρατίθεται παρακάτω.

* Χωρίς νουκλεάση νερό μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αρνητικό έλεγχο.

• Τοποθετήστε το καπάκι της PCR χρησιμοποιώντας καπάκια (στριπές) κατάλληλα για PCR σε πραγματικό χρόνο (δεν παρέχεται).

Δ) Στρογγυλοποιήστε τους σωλήνες σε χαμηλή ταχύτητα για 10 ~ 15 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρώστε τους με 3000 στροφές ανά λεπτό για 20 δευτερόλεπτα και τοποθετήστε τους σε ένα όργανο PCR σε πραγματικό χρόνο.

2) Εγκατάσταση RT-PCR

Ορίστε τον όγκο αντίδρασης σε 25μl και τη διαδικασία ενίσχυσης PCR όπως παρακάτω.

3) Ανάλυση και ερμηνεία των αποτελεσμάτων